無(wú)菌室：
無(wú)菌室一般為4 — 5 平方米、高 2.5 米的獨(dú)立小房間（與外間隔離），專辟于微生物實(shí)驗(yàn)室內(nèi)，可以用板材和玻璃建造。無(wú)菌室外要設(shè)一個(gè)緩沖間，錯(cuò)開門向，以免氣流帶進(jìn)雜菌。無(wú)菌室和緩沖間都必須密閉、室內(nèi)裝備的換氣設(shè)備必須有空氣過(guò)濾裝置。在獲得了無(wú)菌環(huán)境和無(wú)菌材料后，只有保持無(wú)菌狀態(tài)，才能對(duì)某種特定的已知微生物進(jìn)行研究。所以控菌能力和控菌穩(wěn)定性是無(wú)菌室的核心驗(yàn)收指標(biāo)。

無(wú)菌室設(shè)計(jì)規(guī)范：

1.二級(jí)及三級(jí)無(wú)菌室符合中華人民共和國(guó)衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn):WS233-2002 《微生物和生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全通用準(zhǔn)則》。
2.二級(jí)（P2）無(wú)菌室為萬(wàn)級(jí)、局部百級(jí)，符合目前世界通用的美國(guó)聯(lián)邦209E標(biāo)準(zhǔn)。 二級(jí)無(wú)菌室包含高、中、初效過(guò)濾系統(tǒng)，小型中央空調(diào)系統(tǒng)，層流送風(fēng)，井式回風(fēng)。更衣間及風(fēng)淋室采用人體自動(dòng)感應(yīng)系統(tǒng)。
3.各系統(tǒng)技術(shù)指標(biāo)如下：更衣間及操作間送風(fēng)口風(fēng)速≥0.3米/秒,風(fēng)淋室風(fēng)速≥15米/秒,操作間與環(huán)境靜壓差≥5Pa,系統(tǒng)噪聲≤60dB.
4.三級(jí)（p3）無(wú)菌實(shí)驗(yàn)室除具有二級(jí)無(wú)菌室的特點(diǎn)外,還專門設(shè)立了電子互鎖門、傳遞窗門互鎖、環(huán)氧樹脂自流平地面、下水消毒設(shè)施。配置二級(jí)生物安全柜，實(shí)驗(yàn)室及緩沖間均為負(fù)壓空間，實(shí)驗(yàn)間的相對(duì)壓強(qiáng)為-30Pa—-40Pa，緩沖間的相對(duì)壓強(qiáng)為-15Pa—-20Pa。

無(wú)菌室設(shè)計(jì)要求：

1．工作室應(yīng)矮小、平整，面積只需4米2左右，高2.2—2.3米，內(nèi)部裝修應(yīng)平整、光滑，無(wú)凹凸不平或棱角等，四壁及屋頂應(yīng)用不透水之材質(zhì)，便于擦洗及殺菌。
2．室內(nèi)采光面積大，從室外應(yīng)能看到室內(nèi)情況。
3．為保證無(wú)菌室的潔凈，無(wú)菌室周圍需設(shè)緩沖走廊，走廊旁再設(shè)緩沖間，其面積可小于無(wú)菌室。
4．無(wú)菌室、緩沖走廊及緩沖間均設(shè)有日光燈及供消毒空氣用紫外燈，殺菌紫外燈離工作臺(tái)以1米為宜 ，其電源開關(guān)均應(yīng)設(shè)在室外。
5．無(wú)菌室與緩沖間進(jìn)出口應(yīng)設(shè)拉門，門與窗平齊，門縫要封緊，兩門應(yīng)錯(cuò)開，以免空氣對(duì)流造成污染。
6．無(wú)菌室的使用與管理

1） 無(wú)菌室應(yīng)保持清潔整齊，室內(nèi)僅存放最必須的檢驗(yàn)用具如酒精燈、酒精棉、火柴、鑷子、接種針、接種環(huán)、玻璃鉛筆等。
2） 室內(nèi)檢驗(yàn)用具及凳桌等保持固定位置，不隨便移動(dòng)。
3） 每2—3周用2%石炭酸水溶液擦拭工作臺(tái)、門、窗、桌、椅及地面，然后用3%石炭酸水溶液噴霧消毒空氣，最后紫外燈殺菌半小時(shí)。
4） 定期檢查室內(nèi)空氣無(wú)菌狀況，細(xì)菌數(shù)應(yīng)控制在10個(gè)以下，發(fā)現(xiàn)不符合要求時(shí)，應(yīng)立即徹底消毒滅菌。 無(wú)菌室無(wú)菌程度的測(cè)定方法：取普通肉湯瓊脂平板、改良馬丁培養(yǎng)基平板各3個(gè)（平板直徑均9厘米），置無(wú)菌室各工作位置上，開蓋曝露半小時(shí)，然后倒置進(jìn)行培養(yǎng)，測(cè)細(xì)菌總數(shù)應(yīng)置37℃溫箱培養(yǎng)48小時(shí)；測(cè)霉菌數(shù)則應(yīng)置27℃溫箱培養(yǎng)5天。細(xì)菌`霉菌總數(shù)均不得超過(guò)10個(gè)為 。
5） 無(wú)菌室殺菌前，應(yīng)將所有物品置于操作之部位（待檢物例外），然后打開紫外燈殺菌30分鐘，時(shí)間一到，關(guān)閉紫外燈待用。
6） 進(jìn)入無(wú)菌室前，必須于緩沖間更換消毒過(guò)的工作服、工作帽及工作鞋。
7） 操作應(yīng)嚴(yán)格按照無(wú)菌操作規(guī)定進(jìn)行，操作中少說(shuō)話，不喧嘩，以保持環(huán)境的無(wú)菌狀態(tài)。

無(wú)菌室消毒方法：
1.無(wú)菌室定期消毒用甲醛和高錳酸鉀混合熏蒸:一般每平方米需40%甲醛10毫升、高錳酸鉀8毫升，進(jìn)行熏蒸。使用時(shí)，先密閉門窗，量甲醛溶液盛入容器中、然后倒入量好的高錳酸鉀，人員隨之離開接種室，關(guān)緊房門，熏蒸20- -30分鐘即可。
2.0.1%升汞水消毒:用0.1%升汞水浸過(guò)的紗布或海綿進(jìn)行指擦，或用噴霧器噴霧滅菌，使箱內(nèi)的上下左右都沾上升汞水，手也可用升汞水消毒，并把袖子卷起來(lái)。噴霧后20~30分鐘，箱內(nèi)的雜菌和霧滴一起落到箱底被殺死，內(nèi)部的空氣就變得很清潔。
3.紫外線照射滅菌:在無(wú)菌箱中裝一支200伏、30瓦的紫外線燈管;每次開20~30分鐘，就能達(dá)到空間殺菌的目的。照射結(jié)束后，罩黑布半小時(shí)，以增強(qiáng)殺菌效果。
4.石炭酸噴霧:在每次接種之前，用5%石炭酸溶液噴霧，可促使空氣中的微粒和雜菌沉降，防止桌面微塵飛揚(yáng)，并有殺菌作用。
5.石灰揩擦:經(jīng)常用藥物熏蒸，易造成酸性環(huán)境，特別用甲醛和高錳酸鉀熏蒸長(zhǎng)久，污染往往越來(lái)越嚴(yán)重，預(yù)防辦法可把各種藥品交替使用，過(guò)一段時(shí)間(約五周》用石灰擦洗一遍。實(shí)踐證明這樣做效果很好。

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